期刊简介
中国科学技术协会主管，中华医学会主办。本刊是国内惟一涵盖消化外科各领域的高水平专业期刊。该刊为中国科技论文统计源期刊、中国自然科学类核心期刊；已被美国《化学文摘》(CA)、美国《乌利希国际期刊指南》(Ulrich IPD)、美国《剑桥科学文摘》(CSA)、波兰《哥白尼索引》(IC)、英国《国际农业与生物科学研究中心》(CABI)、世界卫生组织西太平洋地区医学索引(WPRIM)、中国科学引文数据库(CSCD)、RCCSE中国核心学术期刊、万方数字化期刊群等收录。办刊宗旨：传播国内外消化外科领域的新理论、新技术和新经验，立志成为联系国内外消化外科同道的纽带，推动我国消化外科学的发展。办刊方针：着重提高，兼顾普及。学术内容：涵盖消化外科各领域的基础与临床研究，包括食管、胃、肠、肝、胆、胰、脾及其相关的血管、内镜、介入治疗、外科营养支持等研究。
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首页>中华消化外科杂志
- 杂志名称：中华消化外科杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：1673-9752
- 国内刊号：11-5610/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：科技期刊论文统计源期刊收录：上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, CA 化学文摘(美), 知网收录(中), 哥白尼索引(波兰), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 农业与生物科学研究中心文摘, 剑桥科学文摘, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 维普收录(中)
绿色荧光蛋白转基因小鼠胎肝干细胞在体内外定向分化的潜能
黄启科；党立力；阮柏；张卓超；刘杰；王兴；郑志刚；陶开山
关键词：绿色荧光蛋白转基因小鼠, 胎肝干细胞, 分离, 鉴定, 示踪
摘要：目的 探讨绿色荧光蛋白转基因小鼠胎肝干细胞(FLSCs)在体内及体外定向分化的潜能.方法 取孕13d绿色荧光蛋白(GFP)转基因C57BL/6J小鼠胚胎肝脏,经机械消化和胶原酶消化获得FLSCs并扩大培养;成熟肝细胞来自于同品系小鼠成体肝脏,通过两步灌注胶原酶消化法提取,流式细胞仪鉴定其干细胞标志物的表达及自我增殖能力,RT-PCR及Western blot测定AFP表达;分别将FLSCs经肝细胞生长因子(HGF)及TGF-3诱导分化后,Real-time PCR检测Alb、角蛋白CK-7、8、19 mRNA以及Western blot检测Alb、角蛋白CK-7、8、19蛋白在诱导前后的表达变化,鉴定其向肝细胞和胆管细胞双向分化的能力;经尾静脉注射FLSCs到野生型C57BL/6J肝切除小鼠体内,观察其在肝内重构肝组织的能力.计量资料采用t检验,各时相点比较采用重复测量的方差分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 成功克隆FLSCs细胞.流式细胞仪检测分离的FLSCs表达上皮细胞黏附分子(EpCAM)、CD133、CD49f干细胞标志物,其阳性表达率分别为78.6％±3.3％、31.7％±2.5％、47.6％±1.8％.AFP mRNA在FLSCs和成熟肝细胞中的相对表达量分别为0.640±0.115和0.053 ±0.012,蛋白相对表达量分别为1.383±0.265和0.243±0.227,两者比较,差异有统计学意义(t=8.772,5.354,P＜0.05).超低黏附培养皿培养FLPCs和成熟肝细胞,其形成克隆球数目分别为(234.0±57.0)个和(5.0±2.0)个,两者比较,差异有统计学意义(t=12.711,P＜0.05).体外HGF诱导FLSCs分化,Alb、CK-8 mRNA表达分别在8、10 d到达峰值,分别为0.851±0.030和0.771±0.031;两者蛋白水平于第10天达峰值,分别为4.573±0.015和1.562±0.029.体外TGF-β诱导FLSCs分化,CK-7、CK-19 mRNA在第12天达峰值,分别为15.454±2.152和10.675±1.822;两者蛋白水平于第14天达峰值,分别为3.423±0.105和1.892 ±0.081.在移植有FLSCs的肝切除小鼠体内可检测到表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的成熟肝细胞及胆管细胞.结论 分离的绿色荧光蛋白转基因FLSCs能够稳定表达绿色荧光,具有显著的肝干细胞特征和向肝细胞和胆管细胞双向分化的潜能,且在体内研究中具有良好的示踪性.
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