活体荧光显微镜技术在观察肝硬化门静脉高压大鼠肝脏微循环结构变化中的应用

摘要：目的 探讨活体荧光显微镜技术观察肝硬化门静脉高压模型大鼠的肝脏微循环结构变化的应用效果.方法 取雄性SD大鼠70只,将其中40只SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组、胆总管结扎(BDL)模型2周组、BDL模型4周组及BDL模型6周组,每组10只,应用活体荧光显微镜技术观察大鼠肝脏微循环结构变化.将余下的30只SD大鼠于BDL模型建立4周后采用随机数字表法分为3组,动态观察给予生理盐水(生理盐水组)、内皮素-1(ET-1,ET-1组)、NO供体亚硝基半胱氨酸(GSNO,GSNO组)后BDL模型大鼠肝脏微循环的急性改变.组间比较采用单因素方差分析,组内比较采用配对样本t检验.结果 BDL模型大鼠共死亡9只,存活率为85.0％ (51/60).假手术组大鼠全部存活.随着BDL造模时间延长,肝脏肝窦直径逐渐变小,BDL模型2周组、BDL模型4周组及BDL模型6周组肝窦直径分别为(13.6±1.0)μm、(8.8 ±0.7) μm和(8.0 ±0.5)μm,与假手术组的(17.4±1.0) μm比较,差异有统计学意义(t=5.86,18.24,15.57,P＜0.05).随着BDL造模时间延长,肝窦开放数量逐渐减少,BDL模型2周组、BDL模型4周组及BDL模型6周组肝窦开放数量分别为(6.8±0.8)个/200 μm、(4.3±1.8)个/200 μm、(4.0±1.2)个/200 μm,与假手术组的(8.8±0.5)/200 μm比较,差异有统计学意义(t=3.25,2.77,2.12,P＜0.05).注射生理盐水15 min后,生理盐水组肝窦直径为(7.2±1.2)μm,与注射前的(6.9±0.5) μm比较,差异无统计学意义(t=0.89,P＞0.05);肝窦开放数量为(6.8±1.4)个/200μm,与注射前的(6.6±0.4)个/200 μm比较,差异无统计学意义(t=1.12,P＞0.05).注射ET-1 15 min后,ET-1组肝窦直径为(5.4±0.5)μm,与注射前的(7.9±0.6)μm比较,差异有统计学意义(t=7.39,P＜0.05);肝窦开放数量为(5.4±1.8)个/200μm,与注射前的(5.8±1.2)个/200μm比较,差异无统计学意义(t=0.84,P＞0.05).注射GSNO 15 min后,GSNO组肝窦直径为(11.4±1.3)μm,与注射前的(7.5±1.7) μm比较,差异有统计学意义(t =5.95,P＜0.05);肝窦开放数量为(6.4±1.6)个/200 μm,与注射前的(5.6±0.8)个/200μm比较,差异无统计学意义(t=0.54,P＞0.05).结论 活体荧光显微镜技术可以通过观察肝脏微循环结构变化在一定程度上评价肝纤维化的程度,并且能够通过动态捕捉肝窦直径和肝窦开放数量在药物作用影响下发生的改变.