水通道蛋白-1及核因子κB在大鼠重症急性胰腺炎肺损伤中的表达及意义

摘要：目的 探讨重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤大鼠肺组织内水通道蛋白-l(AQP-1)、核因子κB(NF-κB)的表达及意义.方法 采用实验研究方法.将48只Wistar大鼠采用随机数字表法分为SAP组和对照组,每组各24只.SAP组大鼠经胰胆管逆行注射5％牛磺胆酸钠(3 mL/kg),术后适量补充生理盐水,构建SAP模型.对照组为相同方法注射生理盐水.两组干预后6、12、24、48 h分批处死大鼠,每个时相点6只.(1)采用免疫组织化学染色检测肺组织中AQP-1、NF-κB的表达.(2)采用RT-PCR检测AQP-1mRNA的表达.(3)采用DNA断裂的原位末端标记(TUNEL)法检测肺组织细胞凋亡的变化.(4)常规HE染色后显微镜下观察肺组织损伤程度.正态分布的计量资料以-x±s表示,组间比较采用方差分析.结果(1)肺组织肉眼观察结果:SAP组大鼠肺组织表现为明显肺水肿,可见肺表面有散在出血点,不同时相点6、12、24、48 h肺脏损伤逐渐加重;对照组大鼠肺组织无明显病理学改变.(2)免疫组织化学染色结果显示:SAP组大鼠支气管黏膜上皮细胞、肺泡上皮细胞、浸润的中性粒细胞、单核巨噬细胞中AQP-1、NF-κB表达阳性;对照组大鼠肺组织中只有极少量肺泡间质细胞及肺上皮细胞表达NF-κB.不同时相点(6、12、24、48 h)SAP组大鼠肺组织的AQP-1阳性细胞率分别为5.4％±1.7％、6.4％±2.6％、6.3％±1.4％、6.3％±1.6％,对照组分别为28.1％±5.0％、31.2％±5.1％、30.1％±6.2％、29.7％±4.9％,两组比较,差异均有统计学意义(F=27.52,23.89,22.85,22.43,P＜0.05).SAP组不同时间点大鼠肺组织NF-κB阳性细胞率分别为58.6％±5.0％、77.8％±5.2％、89.3％±4.8％、92.3％±6.8％;对照组分别为5.4％±1.7％、6.4％±2.6％、6.3％±1.4％、6.3％±1.6％,两组比较,差异均有统计学意义(F=117.76,147.70,200.92,214.64,P＜0.05).(3)RT-PCR检测结果显示;不同时相点6、12、24、48 h SAP组大鼠AQP-1 mRNA相对表达量分别为14.17±0.18、3.56±0.22、2.87±0.21、1.51±0.12,6 h分别与12、24、48 h比较,差异均有统计学意义(F=15.81,24.44,7.57,P＜0.05).12h与24 h、12h与48 h、24 h与48 h分别比较,差异均有统计学意义(F=12.36,9.11,6.58,P＜0.05).(4)细胞凋亡检测及肺损伤程度观察:TU NEL检测结果显示:SAP组大鼠肺损伤组织中细胞凋亡主要分布于单核巨噬细胞、支气管黏膜上皮细胞、肺泡上皮细胞及少数血管内皮细胞;对照组大鼠肺组织内可见少量肺泡间质细胞和肺泡上皮细胞凋亡.SAP组大鼠6、12、24、48 h肺组织的细胞凋亡率分别为18.4％±5.0％、26.9％±5.1％、27.1％±4.2％、28.7％±3.8％;对照组分别为1.5％±0.7％、1.6％±0.6％、1.5％±0.4％、1.5％±0.6％,两组比较,差异均有统计学意义(F=150.47,272.14,335.78,350.64,P＜0.05).SAP组大鼠肺组织12、24、48 h细胞凋亡率显著高于6 h(F=10.25,10.42,11.63,P＜0.05).12h与24 h、12h与48 h、24 h与48 h分别比较,差异均有统计学意义(F=7.22,8.89,7.75,P＜0.05).HE染色后显微镜下观察结果:SAP组随时间变化肺泡组织损伤逐渐加重,肺泡结构紊乱,Ⅱ型肺泡上皮细胞微绒毛减少,肺泡内出血,内皮细胞水肿,细胞间质水肿明显;对照组肺泡上皮细胞及血管内皮细胞结构基本正常.结论SAP肺损伤组织中NF-κB的表达升高,而AQP-1表达降低,细胞凋亡呈时间依赖性.这表明SAP肺损伤中细胞凋亡发挥了重要作用,且NF-κB和AQP-1的异常表达在SAP肺损伤中具有重要意义.