趋化因子受体蛋白CXCR3、CCR5和CCR3在肝硬化脾功能亢进大鼠脾脏组织中的表达及意义

摘要：目的 检测肝硬化脾功能亢进大鼠脾脏组织中辅助性T细胞1型(Th1型)趋化因子受体蛋白CXCR3、CCR5和辅助性T细胞2型(Th2型)趋化因子受体蛋白CCR3的表达及Th1/Th2淋巴细胞亚群平衡状态.方法 采用实验研究方法.将46只雄性SD纯系大鼠,分为脾功能亢进组(36只)和对照组(10只).脾功能亢进组大鼠采用40％ CCl4花生油溶液灌胃,每周2次,每次3.0 mL/kg,15％白酒作为饮用水,共8周制作脾功能亢进大鼠模型.对照组大鼠正常饮食.肉眼观察大鼠形态变化,经HE染色、Masson染色,行肝功能检查及血常规验证肝硬化脾功能亢进模型建立成功后,免疫组织化学染色和Western blot检测两组大鼠脾脏趋化因子受体蛋白CXCR3、CCR5、CCR3的表达.正态分布的计量资料以(x)±s表示,两组间的比较采用独立样本t检验.结果 脾功能亢进组大鼠毛色暗淡并且掉毛严重,食欲不佳,活动量较少,精神萎靡,建模第5周开始,大鼠陆续出现死亡,剩余19只.对照组大鼠毛发色光泽正常,食欲佳,精神状态良好,对外界刺激敏感,活动量正常.肝脏病理形态学变化:脾功能亢进组大鼠肝组织内可见纤维增粗紊乱,肝组织的正常结构被破坏,纤维束分割肝小叶,破坏的肝小叶和部分增生的肝细胞团被较粗的纤维分割包绕,假小叶形成,肝细胞排列紊乱,弥漫散在脂肪细胞,异形细胞,细胞核增大,甚至有多核细胞.对照组大鼠肝组织未见上述变化.脾脏病理形态学变化:脾功能亢进组大鼠脾脏略显肿胀,血管内皮增厚明显,血管内皮增生,红髓扩大,大部分白髓消失,中央动脉管壁存在不同程度的增厚以及管壁的纤维化,脾窦扩张.对照组大鼠脾脏组织未见上述变化.肝功能变化:脾功能亢进组大鼠肝功能ALT和AST水平分别为(264±111) U/L、(687±299) U/L,明显高于正常对照组的(27±8)U/L、(124±20) U/L,两组比较,差异有统计学意义(=5.64,4.98,P＜0.05);脾功能亢进组大鼠TP水平为(54±8)g/L,低于对照组的(65 ±3)g/L,两组比较,差异有统计学意义(t=-3.35,P＜0.05).外周血细胞计数变化:脾功能亢进组大鼠WBC计数为(23.9±5.0)×109/L,高于对照组大鼠的(6.2±2.4)×109/L,两组比较,差异有统计学意义(t=3.50,P＜0.05);脾功能亢进组大鼠RBC、PLT计数分别为(6.3±0.7)×1012/L、(418±124)×109/L,低于对照组的(8.0±0.6) ×1012/L、(1 109±161)×109/L,两组比较,差异有统计学意义(t=-2.28,-4.92,P＜0.05).免疫组织化学染色检测结果:CXCR3、CCR5、CCR3阳性表现为细胞膜和(或)细胞质染成黄色、棕色或棕褐色.脾功能亢进组大鼠CXCR3和CCR5的吸光度A值分别为(81.7 ±24.4) ×10-3、(3.6±1.3) ×10-3,高于对照组的(19.2±5.8) ×10-3、(1.2±0.4)×10-3,两组比较,差异有统计学意义(t=16.22,9.09,P＜0.05);脾功能亢进组CCR3的吸光度A值为(8.8±3.7)×10-3,对照组为(7.9±2.8) ×10-3,两组比较,差异无统计学意义(t=0.87,P＞0.05).脾功能亢进组大鼠CXCR3、CCR5阳性细胞率分别为52％±9％、19％±5％,高于对照组21％±5％、10％±3％,两组比较,差异有统计学意义(t=17.31,8.21,P＜0.05),脾功能亢进组与对照组大鼠CCR3阳性细胞率分别为35％±9％、33％±14％,两组比较,差异无统计学意义(t =0.43,P＞0.05).Western b1ot检测结果:脾功能亢进组大鼠CXCR3和CCR5蛋白的相对表达量分别为2.45 ±0.85、0.94 ±0.48,高于对照组的1.31 ±0.95、0.32 ±0.26,两组比较,差异有统计学意义(=2.62,2.91,P＜0.05),而脾功能亢进组大鼠CCR3蛋白的相对表达量为0.47 ±0.27,低于对照组的0.92±0.67,两组比较,差异有统计学意义(t=-2.18,P＜0.05).结论 CCl4致肝硬化脾功能亢进大鼠脾脏中趋化因子受体蛋白异常表达,提示Th1/Th2淋巴细胞亚群已失衡,可能参与了外周血细胞减少的调控.