乙型肝炎病毒X蛋白对肝癌细胞侵袭与迁移能力的作用及机制

摘要：目的 探讨乙型肝炎病毒X(HBx)蛋白对肝癌细胞侵袭与迁移能力的作用及机制.方法 采用回顾性队列研究方法.收集2014年7月至2015年7月徐州医科大学附属医院收治的30例肝肿瘤患者[20例肝细胞癌(简称肝癌)、10例肝脏良性肿瘤)]的临床病理资料.收集20例肝癌患者(均有HBV感染史)行手术切除的肝癌组织及10例肝脏良性肿瘤患者(均无HBV感染史)的瘤旁组织(瘤体包膜外组织).采用免疫组织化学染色检测肝癌组织与瘤旁组织中人类表皮生长因子受体3(ErbB3)蛋白表达.采用Western blot检测肝癌组织与瘤旁组织中ErbB3蛋白和HBx蛋白相对表达量,以及转染绿色荧光蛋白(GFP)质粒的肝癌细胞株HepG2和转染GFP-HBx质粒的HepG2中ErbB3蛋白相对表达量.采用RT-PCR检测转染GFP质粒的HepG2和转染GFP-HBx质粒的HepG2中ErbB3 mRNA相对表达量.采用铺基质胶Transwell法检测HepG2侵袭能力,不铺基质胶Transwell法检测HepG2迁移能力.正态分布的计量资料采用x±s表示,组间比较采用独立样本t检验.采用Pearson检验进行相关性分析.结果 (1)免疫组织化学染色检测ErbB3蛋白表达情况:20例原发性肝癌患者的肝癌组织及10例肝脏良性肿瘤患者的瘤旁组织中ErbB3蛋白平均光密度(MOD)相对值分别为2.54± 1.33和0.99±0.29,两者比较,差异有统计学意义(t=6.542,P＜O.05).(2) Western blot检测ErbB3蛋白和HBx蛋白表达情况:10例原发性肝癌患者的肝癌组织及10例肝脏良性肿瘤患者的瘤旁组织中ErbB3蛋白相对表达量分别为0.79±0.13和1.10±0.28,HBx蛋白相对表达量分别为1.07±0.17和0,两者上述指标比较,差异均有统计学意义(t=3.229,19.486,P＜0.05).Pearson检验结果显示:肝癌组织中ErbB3蛋白与HBx蛋白表达成正相关(r=0.637,P＜O.05).(3) Western blot和RT-PCR检测HepG2中ErbB3蛋白表达及转录水平情况:转染GFP质粒的HepG2和转染GFP-HBx质粒的HepG2中ErbB3蛋白相对表达量分别为0.75±0.11和1.10±0.10,两者比较,差异有统计学意义(t=4.291,P＜O.05).转染GFP质粒的HepG2和转染GFP-HBx质粒的HepG2中ErbB3 mRNA相对表达量分别为0.38±0.03和0.94±0.07,两者比较,差异有统计学意义(t=11.703,P＜O.05).(4)ErbB3蛋白对HepG2侵袭、迁移能力的影响:铺基质胶Transwell法检测转染His质粒的HepG2和转染His-ErbB3质粒的HepG2穿膜细胞数分别为(271±18)个和(463±31)个,两者比较,差异有统计学意义(t=8.202,P＜0.05).不铺基质胶Transwell法检测转染His质粒的HepG2和转染His-ErbB3质粒的HepG2穿膜细胞数分别为(315±38)个和(549±34)个,两者比较,差异有统计学意义(t=8.310,P＜0.05).结论 HBx蛋白可通过上调ErbB3蛋白表达,促进肝癌细胞侵袭与迁移.